ИСТИНА

В диссертационной работе представлена новая научная идея о регуляции работы теломеразы компонентом теломеразного комплекса дрожжей Saccharomyces cerevisiae; предложена оригинальная научная гипотеза о взаимодействии компонента теломеразного комплекса дрожжей Saccharomyces cerevisiae белка Est3 с теломерными ДНК-квадруплексами, объясняющая его роль в регуляции активности теломеразного комплекса дрожжей Saccharomyces cerevisiae; доказано наличие закономерности в системе поддержания длины теломер с помощью теломеразы в различных организмах, основанной на формировании ДНК-квадруплексов и взаимодействии с ними компонентов теломеразного комплекса; введены новые представления о механизме биогенеза теломер.Выдвинута и подтверждена экспериментально гипотеза о специфичном взаимодействии Est3 теломеразного комплекса дрожжей S.cerevisiae с теломерными ДНК-квадруплексами; доказаны следующие положения: 1) узнавание различных квадруплексов белком Est3 основано на взаимодействии с петлёй в составе ДНК-квадруплекса; 2) взаимодействие белка Est3 c ДНК-квадруплексом ингибирует гидролиз ГТФ белком Est3; 3) ГТФазная активность белка Est3 коррелирует с его димеризацией и стимулируется ионами магния; применительно к проблематике диссертации результативно (эффективно, то есть с получением обладающих новизной результатов) использован комплекс базовых методов выделения и исследования белков, нуклеиновых кислот, нуклеопротеидов, а также использован комплекс современных методов автоматизации и повышения точности измерений; изложены доказательства наличия у белка Est3 нового свойства – способности взаимодействовать с ДНК-квадруплексом и роли такого взаимодействия в работе теломеразного комплекса, также изложены факты, характеризующие ГТФазную активность белка Est3, его способность образовывать димеры, и аргументы, подтверждающие наличие связи между этими свойствами; раскрыта взаимосвязь в регуляции теломеразного комплекса в таких эволюционно далёких организмах как инфузории, дрожжи и человек изучены: 1) ГТФазная активность белка Est3; 2) димеризация белка Est3; 3) взаимодействие белка Est3 с теломерными ДНК-квадруплексами; проведена модернизация существующих подходов к: 1) формированию ДНК-квадруплексов, образованных теломерными повторами дрожжей S.cerevisiae; 2) изучению ДНК-белковых комплексов, в которых ДНК имеет структуру квадруплекса; 3) определению константы ферментативного гидролиза ГТФ in vitro белком Est3 теломеразного комплекса дрожжей S.cerevisiae.