ИСТИНА

Одной из наиболее перспективных и социально востребованных биосенсорных систем является фенольный датчик на основе тирозиназы. Помимо непосредственного анализа фенолов биосенсоры на основе тирозиназы имеют важное приложение - они используются для анализа активности токсикологически важных ферментов, использующих производные фенола в качестве субстратов. Для создания высокочувствительного тирозиназного биосенсора необходимо эффективно закрепить на поверхности графита как тирозиназу (фермент семейства оксидоредуктаз, осуществляющий окисление анализируемого фенола до электроактивного о-хинона), так и медиатор (метоксиметилфеназоний метосульфат натрия, медиатор электровосстановления о-хинона). Для этого мы использовали интенсивно развивающуюся в последнее время технологию "слой-за-слоем" (layer-by layer technology, LBL technology), основанную на чередующейся адсорбции положительных и отрицательно заряженных полиионов. Оптимизация состава и способа изготовления тирозиназных биосенсоров по технологии "слой-за-слоем" проводилась путем подбора поликатион-полианионной пары, нахождения оптимального числа слоев, времени и условий сорбции полиэлектролитов, а также изучения влияния предварительной обработки поверхности графита на свойства полученных электродов. Была исследована операционная стабильность тирозиназных сенсоров, получены их аналитические и кинетические характеристики. Предел детекции по фенолу составил 6 нМ. Был проведен анализ ферментативной активности бутирилхолинэстеразы и нейротоксичной эстеразы в кинетическом режиме по скорости гидролиза фенилвалерата. Проведено исследование поверхности электродов с помощью АСМ. Таким образом, была оптимизирована методика конструирования тирозиназных электродов по технологии "слой-за-слоем", были охарактеризованы несколько вариантов полученных электродов и исследованы их аналитические и кинетические характеристики. Также для электродов данного типа была впервые продемонстрирована возможность анализа ферментативной активности в кинетическом режиме по скорости гидролиза фенилвалерата.