ИСТИНА

Мембрансвязанная Ni-Fe-содержащая гидрогеназа HynSL из пурпурной серной бактерии Thiocapsa roseopersicina BBS сохраняет каталитическую активность после выделения из мембран, она термостабильна и толерантна к действию кислорода. В этой связи данная гидрогеназа представляет практический интерес как основа для создания стабильных ферментных электродов, способных заменить платину в качестве катализатора в ферментных топливных элементах и в сенсорных системах на водород. В настоящей работе рассмотрены новые подходы к выделению и очистке фермента. Выделение гидрогеназы проводили ультразвуком не по общепринятой методике из ацетоновых порошков клеток T. roseopersicina BBS, а непосредственно из обработанных ацетоном фракций мембран, что позволит впоследствии сократить количество стадий очистки, увеличить выход фермента и удешевить процессы выделения и очистки. В результате последующих стадий (фракционирование сульфатом аммония, гидрофобная и анионообменная хроматография, хроматофокусирование) был получен гомогенный активный препарат фермента. По данным MALDI-TOF масс-спектрометрии очищенный фермент является стабильной Ni-Fe-содержащей гидрогеназой, кодируемой геном hynSL. Полученный препарат фермента иммобилизовали на электрод, который представлял собой углеродную ткань, модифицированную нейтральным красным. Наблюдали характерную для водородных ферментных электродов электрохимическую активность. На электроде устанавливался равновесный водородный потенциал, а при положительных значениях перенапряжения в атмосфере водорода наблюдали значительные анодные токи окисления H2.