ИСТИНА

Трансляция – важный процесс в жизнедеятельности всех организмов, в том числе и бактерий. В ходе него происходит синтез полипептидных цепей белка из аминокислот рибосомой на основе информации, записанной в мРНК в виде нуклеотидной последовательности. Важность роли мРНК заключается не только в передачи наследственной информации с ДНК на рибосому, но и в участии ее различных элементов в регуляции трансляции и определении оптимальной степени экспрессии гена для обеспечения динамических потребностей клетки. Ранее в исследованиях было показано, что 5’- нетранслируемая область бактериальной мРНК содержит набор важных особенностей, заметно влияющих на трансляцию. Однако до сих пор не ясно, какие именно последовательности в этой области по существу задают определенный уровень экспрессии гена, дают возможность рибосоме связываться с мРНК, инициировать трансляцию и как можно быстрее приступать к элонгации. В задачу курсовой входила разработка метода для более подробного изучения влияния на эффективность трансляции длины и состава одного из отличительных элементов бактериальной мРНК - участка между последовательностью Шайна-Дальгарно и стартовым кодоном, путём создания плазмид с двойной репортёрной конструкцией, содержащей рандомизированную вставку, и дальнейшей трансформации их в клетки Escherichia coli. Используемая конструкция основана на генах двух флуоресцентных белков RFP и CER, первый из которых (RFP) является внутренним контролем, а экспрессия второго (CER) отражает эффективность той или иной 5’-нетранслируемой области мРНК. Исследуемый элемент мРНК может представлять интерес при разработке метода, позволяющего с определенной точностью задавать интересующий уровень синтеза белка.